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          使用淋巴細胞分離液時(shí)要注意的事項有哪些

          更新時(shí)間:2022-04-30      1583
            淋巴細胞分離液是一種根據細胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細胞的分離純化的常用試劑??捎糜隗w外分離外周淋巴血細胞,也可以從其他來(lái)源中分離單核細胞,包括臍帶血細胞和骨髓細胞,適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞,在醫療和醫學(xué)生物中廣泛應用。其他人及動(dòng)物多種比重細胞分離液。
            淋巴細胞分離液的原理:
            外周血中單個(gè)核細胞和單核細胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細胞不同.淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。
            淋巴細胞分離液使用時(shí)需要注意:
            1.在正常大氣壓下,分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,操作前可將樣本和分離液復溫至18-22℃。為獲得理想的實(shí)驗結果,在取血后2小時(shí)內進(jìn)行實(shí)驗,血液提取后存放時(shí)間越長(cháng)細胞活性越低。
            2.實(shí)驗過(guò)程中,如需稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液,其成分會(huì )導致血細胞凝集,大大降低細胞得率及純度。
            3.抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素,其他抗凝劑也可使用,但會(huì )影響細胞活性。應注意在血液稀釋過(guò)程中去除抗凝劑體積。
            4.實(shí)驗操作時(shí),不可使用含粉手套、不可使用內毒素含量過(guò)高的液體,手套中的粉末顆粒及高內毒素會(huì )激活淋巴細胞從而降低細胞得率及活性。
            5.不可使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,其帶有的靜電作用將導致細胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。
            6.吸取過(guò)多的淋巴細胞層及分離液層會(huì )導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數量增加。吸取過(guò)多的淋巴細胞層上層溶液會(huì )導致血漿蛋白及血小板混雜。
            7.如需進(jìn)行B、T細胞計數,則需血液貯藏時(shí)間不得多于10小時(shí),否則將導致細胞被激活,得率降低。
            8.為去除所混雜的血小板,可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。
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